Ralstonia eutropha es la bacteria más utilizada en la producción de poli-b-hidroxibutirato (PHB) por su capacidad de acumular polímero hasta en un 80% de su peso seco. En el presente trabajo se realizaron fermentaciones por lote alimentado en dos etapas a escala 3 litros usando tres concentraciones de fructosa (5, 10 y 15 g/l). En la primera etapa, manteniendo constante la relación carbono-nitrógeno en 6.85 g C/g N, se buscó obtener una alta concentración celular; en la segunda etapa las células obtenidas se limitaron en la fuente de nitrógeno para permitir la acumulación del biopolímero. La mejor concentración para producir el material es 5 g/l en la cual se obtuvo un porcentaje de acumulación del 66.2%, una velocidad de crecimiento específico inicial de 0.5171 h-1 y una productividad de 0.1245 g PHB/ l h.